Immunochimie en multiplex pour les modèles d'expression protéique, de co-expression et de relations spatiales

Date : avril 2018

Author: Shayna Donoghue | Associate Scientist, In Vitro Operations - IHC

L'immunohistochimie en multiplex (IHC) est un test qui utilise le concept de base de la coloration d'un seul antigène pour détecter plusieurs marqueurs en même temps. Elle permet d'étiqueter la peroxydase, la phosphatase alcaline et d'autres anticorps conjugués primaires ou secondaires et peut être réalisée à l'aide de plusieurs méthodes courantes, y compris des protocoles de coloration directe ou indirecte.

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L'immunohistochimie en multiplex (IHC) est un test qui utilise le concept de base de la coloration d'un seul antigène pour détecter plusieurs marqueurs en même temps. Elle permet d'étiqueter la peroxydase, la phosphatase alcaline et d'autres anticorps conjugués primaires ou secondaires et peut être réalisée à l'aide de plusieurs méthodes courantes, y compris des protocoles de coloration directe ou indirecte.

Les chercheurs se sont concentrés sur l'IHC en multiplex en raison des nombreux avantages que présente l'utilisation de plusieurs anticorps à la fois. Elle nous permet de recueillir de plus grandes quantités de données en une seule fois tout en conservant des échantillons de tissus très précieux. Des données spatiales peuvent être obtenues pour une cible protéique par rapport à une autre, ainsi que proportionnellement à l'architecture des tissus ou des organites qui sont à proximité. Elle est souvent utilisée pour déterminer des sous-groupes de marqueurs immuno-oncologiques dans les tumeurs, ce qui nous permet de mieux comprendre ce qui se passe dans l'environnement de la tumeur. L'IHC en multiplex est également devenue une solution importante pour déterminer la coexpression des marqueurs dans les cellules.

Fig. 1 : Coloration d'une tumeur CT26 CD3 (rose), CD4 (vert) et DAPI (bleu).
Fig. 1 : Coloration d'une tumeur CT26 CD3 (rose), CD4 (vert) et DAPI (bleu).

L'IHC en multiplex peut être réalisée à l'aide de plusieurs protocoles, dont beaucoup suivent le même concept que les méthodes de coloration d'un seul anticorps. L'une des approches peut comprendre différentes variations d'IHC indirectes. Selon la conception du test, l'IHC en multiplex indirect peut être réalisée en utilisant des anticorps hôtes identiques ou différents avec des anticorps secondaires conjugués à des fluorophores. Les anticorps secondaires conjugués à la peroxydase de raifort (HRP) ou à la phosphatase alcaline (AP) peuvent également être utilisés pour détecter des marqueurs multiples avec des chromogènes de différentes couleurs. Étant donné que plusieurs anticorps secondaires peuvent se lier à un anticorps primaire, le signal est amplifié, ce qui permet de visualiser plus facilement les protéines à faible expression.
Fig. 2 : Coloration d'une tumeur CT26 CD3 (rose), CD4 (vert), CD45 (rouge) et DAPI (bleu).

Fig. 2 : Coloration d'une tumeur CT26 CD3 (rose), CD4 (vert), CD45 (rouge) et DAPI (bleu).

Labcorp is now offering up to four-color multiplexing with conjugated antibodies and is continuously striving to validate new multiplexing options such as chromogen detection. Des protocoles optimisés ont été développés sur le Bond RXm Autostainer pour une coloration homogène et sur le scanner Aperio VERSA pour obtenir les images des données en haute résolution. Contact Labcorp to learn more about custom marker requests for multiplex IHC as well as our other IHC services.

Références

 
Remarque : Veuillez noter que toute la prise en charge des animaux et l'utilisation de ceux-ci ont été effectuées conformément à la réglementation sur le bien-être des animaux dans un établissement accrédité par l'AAALAC, avec examen et approbation du protocole de l'IACUC.

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