Immunochimie en multiplex pour les modèles d'expression protéique, de co-expression et de relations spatiales

L'immunohistochimie en multiplex (IHC) est un test qui utilise le concept de base de la coloration d'un seul antigène pour détecter plusieurs marqueurs en même temps. Elle permet d'étiqueter la peroxydase, la phosphatase alcaline et d'autres anticorps conjugués primaires ou secondaires et peut être réalisée à l'aide de plusieurs méthodes courantes, y compris des protocoles de coloration directe ou indirecte.

AUTEUR :

Shayna Donoghue | Scientifique associée, opérations in vitro, IHC

DATE :

 Avril 2018

 

L'immunohistochimie en multiplex (IHC) est un test qui utilise le concept de base de la coloration d'un seul antigène pour détecter plusieurs marqueurs en même temps. Elle permet d'étiqueter la peroxydase, la phosphatase alcaline et d'autres anticorps conjugués primaires ou secondaires et peut être réalisée à l'aide de plusieurs méthodes courantes, y compris des protocoles de coloration directe ou indirecte.

Les chercheurs se sont concentrés sur l'IHC en multiplex en raison des nombreux avantages que présente l'utilisation de plusieurs anticorps à la fois. Elle nous permet de recueillir de plus grandes quantités de données en une seule fois tout en conservant des échantillons de tissus très précieux. Des données spatiales peuvent être obtenues pour une cible protéique par rapport à une autre, ainsi que proportionnellement à l'architecture des tissus ou des organites qui sont à proximité. Elle est souvent utilisée pour déterminer des sous-groupes de marqueurs immuno-oncologiques dans les tumeurs, ce qui nous permet de mieux comprendre ce qui se passe dans l'environnement de la tumeur. L'IHC en multiplex est également devenue une solution importante pour déterminer la coexpression des marqueurs dans les cellules.

 

Fig. 1 : Coloration d'une tumeur CT26 CD3 (rose), CD4 (vert) et DAPI (bleu).
Fig. 1 : Coloration d'une tumeur CT26 CD3 (rose), CD4 (vert) et DAPI (bleu).

 

L'IHC en multiplex peut être réalisée à l'aide de plusieurs protocoles, dont beaucoup suivent le même concept que les méthodes de coloration d'un seul anticorps. L'une des approches peut comprendre différentes variations d'IHC indirectes. Selon la conception du test, l'IHC en multiplex indirect peut être réalisée en utilisant des anticorps hôtes identiques ou différents avec des anticorps secondaires conjugués à des fluorophores. Les anticorps secondaires conjugués à la peroxydase de raifort (HRP) ou à la phosphatase alcaline (AP) peuvent également être utilisés pour détecter des marqueurs multiples avec des chromogènes de différentes couleurs. Étant donné que plusieurs anticorps secondaires peuvent se lier à un anticorps primaire, le signal est amplifié, ce qui permet de visualiser plus facilement les protéines à faible expression.

Une autre approche qui peut être utilisée est la méthode directe. La détection directe peut également être réalisée en utilisant le même hôte ou des anticorps primaires différents de l'hôte, mais elle permet une plus grande flexibilité dans la conception du test. Il n'est pas nécessaire d'achever le processus de coloration pour chaque marqueur avant de commencer l'étape suivante ou d'intégrer plusieurs types de techniques de blocage tout au long du processus. La détection directe est également flexible en termes d'étiquetage des protéines car les anticorps primaires peuvent être conjugués avec des marqueurs de peroxydase de raifort (HRP) ou de phosphatase alcaline (AP).

Fig. 2 : Coloration d'une tumeur CT26 CD3 (rose), CD4 (vert), CD45 (rouge) et DAPI (bleu).
Fig. 2 : Coloration d'une tumeur CT26 CD3 (rose), CD4 (vert), CD45 (rouge) et DAPI (bleu).

 

Covance propose désormais le multiplexage en quatre couleurs avec des anticorps conjugués et s'efforce en permanence de valider de nouvelles options de multiplexage telles que la détection des chromogènes. Des protocoles optimisés ont été développés sur le Bond RXm Autostainer pour une coloration homogène et sur le scanner Aperio VERSA pour obtenir les images des données en haute résolution. Contactez Covance pour en savoir plus sur les demandes de marqueurs personnalisés pour l'IHC en multiplex, mais aussi sur nos autres services d'IHC.

 

Remarques : les études ont été réalisées conformément aux réglementations applicables pour le bien-être animal et dans un centre agréé par l'AAALAC.